HPLC分析,尤其是正相色譜的分析受溫度的影響特別大,反相分析一般受影響不大,有些物質(zhì)的分析必須在固定的溫度下進行。之前用鈣柱做過葡萄糖的分析,要求必須柱溫85度。
而在色譜定性方法中,柱溫變化對定性結(jié)果的影響如下:
?、佼?dāng)采用絕對保留值定性時,其他色譜條件不變,柱溫變化時,保留時間就會發(fā)生變化,這樣就直接影響定性結(jié)果判斷。
②當(dāng)采用相對保留值α定性時,α只是柱溫和固定液的函數(shù),只與待測組分的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),消除了外界因素的影響,因此跟柱溫變化關(guān)系不大,但是柱溫變化影響判斷結(jié)果。
?、郛?dāng)采用保留指數(shù)定性時,恒溫分析,保留指數(shù)與保留時間有關(guān),而柱溫影響保留時間變化;程序升溫分析,除了保留時間,保留指數(shù)還與保留溫度有關(guān)。因此,這種定性方法易受柱溫變化影響。
?、墚?dāng)采用純樣疊加法定性時,已知混合物中含某組分,將該組分的純樣加入,觀察加入前后的響應(yīng)信號變化。柱溫變化,保留時間變化,但是加入前后的樣品影響信號變化是一致的,因此柱溫變化不影響采用這種方法定性的結(jié)果。
而在定量計算時,經(jīng)常要用到校正因子,如重量校正因子,和組分的質(zhì)量以及響應(yīng)信號有關(guān)。柱溫變化,峰高變化,峰面積不變,因此,在柱溫變化不影響峰形正常的前提下,以峰高為響應(yīng)信號的重量校正因子,受柱溫影響,而以峰面積為響應(yīng)信號的重量校正因子將不受影響。常見定量方法中,在柱溫波動不影響出峰效果的前提下,對定量結(jié)果的影響如下:
①采用歸一化法時,定量時需要各組分的校正因子,當(dāng)以峰面積為響應(yīng)信號時,定量結(jié)果不受影響,以峰高為響應(yīng)信號則受影響。
②采用內(nèi)標(biāo)法時,需要計算定量校正因子,影響規(guī)律和①同。
?、鄄捎猛鈽?biāo)法時,即標(biāo)準(zhǔn)曲線法,當(dāng)以峰面積為響應(yīng)信號時,不受影響,但是當(dāng)以峰高為響應(yīng)信號時,影響很大。
總之,柱溫變化可能會導(dǎo)致定性、定量分析結(jié)果的變化。